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UV1901PC紫外可見分光光度計測乙酰色氨測定法

本法系用紫外-可見分光光度法（吸收系數(shù)法）測定

人血白蛋白供試品中的乙酰-DL-色氨酸含量。

測定法用生理氯化鈉溶液將供試品蛋白質(zhì)稀釋至

5 % ，即為供試品溶液。量取供試品溶液0.1ml，分別加

人生理氯化鈉溶液0. 3ml和0. 3mol/L高氯酸溶液3. 6ml，

混勻；另取生理氯化鈉溶液0.4ml，加0. 3mol/L高氯酸

溶液3. 6 m l ,混勻，作為空白對照。室溫放置1 0分鐘，

以每分鐘3500轉(zhuǎn)離心2 0分鐘，取上清液在波長28 0 n m處

測定吸光度，用空白溶液調(diào)零點。按下式計算供試品中的

乙酰-DL-色氨酸含量：

供試品/V-乙酰-DL-色氨酸含量_ (A2SQ Xn) /5. 25

(mmol/g) P

式中〃為供試品的稀釋系數(shù)；

5. 2 5為N -乙酰-DL-色氨酸的毫摩爾吸收系數(shù)；

P 為供試品的蛋白質(zhì)含量，g/L。

3 1 1 3 苯酚測定法

本法系依據(jù)溴酸鹽溶液與鹽酸反應(yīng)產(chǎn)生溴，遇苯酚生

成三溴苯酚，過量的溴與碘化鉀反應(yīng)釋出碘，析出的碘用

硫代硫酸鈉滴定液滴定，根據(jù)硫代硫酸鈉滴定液的消耗

量，可計算出供試品中苯酚的4 量。

測定法精密量取供試品lml，置具塞錐形瓶中，加

水50ml，精密加人0. 02mol/L溴溶液（稱取溴酸鉀

0.56g，加溴化鉀3g，加水溶解并稀釋至1000ml) 15?

25ml (供試品含苯酚量0_ 3 % ?0 . 5 %時加25ml，小于

0.3%則加15ml)，沿瓶壁加人6mol/L鹽酸溶液10ml，搖

勻，密塞，在暗處放置30分鐘后，加2 5 %碘化鉀溶液2ml

于具塞錐形瓶頸口，稍啟瓶塞，使流下，密塞，搖勻。以

少量水洗瓶頸，用硫代硫酸鈉滴定液（0.02mol/L) 滴定至

近終點時，加淀粉指示液約0.5ml，滴定至藍(lán)色消失，并

將滴定的結(jié)果用空白試驗校正。

按下式計算：

苯酚含量（％) - (V°~Vl) XcX15. 69X100

式中V。為空白試驗消耗硫代硫酸鈉滴定液的體積，ml;

V i 為供試品消耗硫代硫酸鈉滴定液的體積，ml;

c為硫代硫酸鈉滴定液的濃度，mol/L;

15. 6 9為苯酚分子量的1/6。

【附注】（1 )硫代硫酸鈉滴定液（0. lmol/L) 的制備

及標(biāo)定稱取硫代硫酸鈉26g與無水碳酸鈉0. 20g，加新

沸過的冷水適量溶解并稀釋至1000ml，搖勻，放置1 個

月后濾過。取在__________120°C干燥至恒重的基準(zhǔn)重鉻酸鉀0. 15g，

精密稱定，置碘瓶中，加水50ml溶解，加碘化鉀2.0g,

輕輕振搖使溶解，加稀硫酸（5.7— 100) 4 0 m l ,搖勻，密

塞；在暗處放置1 0分鐘后，加水250ml稀釋，用本液滴

定至近終點時，加淀粉指示液（稱取可溶性淀粉0.5g，

加水5ml混懸后緩緩傾人100ml沸水中，隨加隨攪拌，繼

續(xù)煮沸2 分鐘，冷卻，傾取上層清液。本液應(yīng)臨用配制）

3 m l ,繼續(xù)滴定至藍(lán)色消失而顯亮綠色，并將滴定的結(jié)果

用空白試驗校正。每l ml硫代硫酸鈉滴定液（0. lmol/L)

相當(dāng)于4.903mg重鉻酸鉀。根據(jù)本液的消耗量與重鉻酸

鉀的取用量，算出本液的濃度，即得。

( 2 )硫代硫酸鈉滴定液（0.02mol/L) 的制備精密

量取硫代硫酸鈉滴定液（0. lmol/L) 100ml, 加水準(zhǔn)確稀

釋至500ml，搖勻。

( 3 )可做限度測定。